腸激酶(Enterokinase, EK)是一種高度專(zhuān)一性識(shí)別 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys 序列的蛋白酶,在 Lys 的 C 端水解多肽。具有高度專(zhuān)一性,水解效率高的特點(diǎn)??稍谳^寬的 pH 范圍(4.5~9.5)和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白??沙ノ挥诘鞍踪|(zhì) N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標(biāo)簽。
冀百康重組腸激酶凍干粉采用重組畢赤酵母高效分泌表達(dá)技術(shù),經(jīng)層析純化、超濾、冷凍干燥制成的凍干粉。本品氨基酸序列來(lái)源于牛腸激酶序列,含有 6 個(gè)組氨酸標(biāo)簽,不含其他蛋白酶。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):
無(wú)動(dòng)物源性:無(wú)動(dòng)物病毒、無(wú)致病物質(zhì)、無(wú)外源因子污染,安全性高。
生產(chǎn)規(guī)模 1000L以上,批間質(zhì)量穩(wěn)定。
合規(guī)性:生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求,符合GMP指導(dǎo)原則。
質(zhì)量文件完整:按客戶(hù)需求,可提供相關(guān)法規(guī)支持文件。
產(chǎn)品中文名同義詞:腸蛋白酶、腸胨酶、腸激活酶、腸肽酶
本品僅供研究使用,不得用于動(dòng)物或人類(lèi)的診斷或治療。
[運(yùn)輸及儲(chǔ)存穩(wěn)定性]
運(yùn)輸穩(wěn)定性:冰袋運(yùn)輸,活性穩(wěn)定。
儲(chǔ)存穩(wěn)定性:-15℃及以下,24 個(gè)月穩(wěn)定,25℃,一周內(nèi)無(wú)活.性損失。緩沖體系:50mM Tris-HCl,pH8.0,250mM NaCl,2mMCa2+,50%甘油。
凍融穩(wěn)定性:反復(fù)凍融 5 次,無(wú)活性損失。
【推薦使用方法】
25℃酶切條件為:25mM Tris-HCl pH8.0 體系中融合蛋白 0.1-1mg/ml(蛋白總量 50-100μg),重組 EK 0.1~2U,酶切 16~24 小時(shí),用 SDS-PAGE 檢測(cè)酶切效果。
4℃酶切條件為:可在 4℃對(duì)底物進(jìn)行有效低溫酶切,但需要將酶切時(shí)間延長(zhǎng)至 48~64 小時(shí),或增加 2-3 倍酶量。低溫酶切有時(shí)候可獲得比 25℃更好的酶切效果。
在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果會(huì)受影響??蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切:
1) 為獲得理想酶切結(jié)果,請(qǐng)將樣品透析到 25mM Tris-HCl pH 8.0 緩沖液中,再進(jìn)行酶切;
2) 若不便透析,可將樣品稀釋?zhuān)溥蚝吭?100mM 以下,NaCl 濃度在 50mM 以下,甘油濃度 5% 以下進(jìn)行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即 1U 酶切 500μg 蛋白);
3) 如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,且不便去除,此時(shí)適當(dāng)增加酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間,也可 達(dá)到較好酶切效果。
可對(duì)酶切條件進(jìn)行優(yōu)化,例如緩沖液 pH,融合蛋白濃度,EK 的量,以及酶切時(shí)間,融合蛋白能在穩(wěn)定條 件下被酶切,用 SDS-PAGE 檢測(cè)酶切效果。
去除重組腸激酶的辦法:可使用胰蛋白酶抑制劑親和層析去除重組腸激酶。
注意:不建議 37℃條件下酶切,可能會(huì)有非特異性酶切出現(xiàn)。
持續(xù)更新中......
牛腸激酶
畢赤酵母
類(lèi)白色粉末
≥1000U/mg pro.
≥20.0%
單一主條帶
35±7 kDa
* 實(shí)際參數(shù)以產(chǎn)品每批次COA為準(zhǔn);